產品類別：巨核細胞的分離
 
產品編號：MAG2014D
 
產品名稱：狗巨核細胞分離液試劑盒
 
產品規格：2X200ml/Kit
 
產品價格：￥800.00元
 
本品用于分離狗巨核細胞


“XXXX”動物巨核細胞分離液實驗方法
 
技術文檔編號：TBD0050SOP
 
【產品規格】
 
2×200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
 

	名稱	產品編號	規格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
F	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備骨髓單細胞懸液，制備方法詳見“骨髓沖洗單細胞懸液制備技術”。

 

• 取一支 15ml 離心管，先加入 3ml 分離液 1 后加入 2ml 分離液 2，制成梯度界面。

 

• 用吸管小心吸取骨髓單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據骨髓單細胞懸液量確定離心條件，骨髓單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
• 離心后，此時離心管中將出現兩層環狀乳白色細胞層。

 

• 用吸管小心吸取上層環狀乳白色目的細胞層到另一 15ml 離心管中，向離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

10. 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。
 
分離圖例
 

【差異貼壁法純化細胞】
 
（1）用巨核細胞無血清培養基（產品編號：MEGTBD2015）或巨核細胞完全培養基（產
 
品編號：HMEGTBD2015）以 1.5-3×10⁶ 個/ml 的密度重懸細胞，將細胞鋪于一次性細
 
胞板或細胞瓶中，放于 37℃二氧化碳培養箱中進行貼壁培養。
 
（2）2-4 小時內貼壁的為巨噬細胞前體（俗稱為單核細胞）。
 
（3）10-24 小時內貼壁的單個核細胞為內皮、內皮祖細胞、干細胞。
 
（4）不貼壁的為淋巴細胞。
 
注：
 

• 無血清培養基中不含任何動物成分，為得到更佳培養效果可添加 10%自體血漿或2-8% 經篩選的胎牛血清。
• 完全培養基中含 2-20%胎牛血清（血清具體含量由所培養的目的細胞而定）。

 

• 由于每種細胞的貼壁時間存在差異可將所得細胞分開已達簡單的純化目的，此法成本相對較低。如需獲得高純度目的細胞則需在使用分離液后選用免疫磁珠陽性或陰

 
性分選。
 
【注意事項】
 
1. 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最

好在取樣 2h 內進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后
 
分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 吸取過多的目的細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加。

 

• 分離液用量大于骨髓單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯系技術支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗巨核細胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
 

		紅細胞			白細胞		血小板
				（4.0-10.0）×109
含量（個/L）		（4.0-5.5）×1012		中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×1011
				50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關實驗技術方案】
1.	骨髓沖洗單細胞懸液制備技術。
2.	所獲得巨核細胞的培養技術。
3.	所獲得巨核細胞的核酸提取技術。
4.	所獲得巨核細胞的鑒定方法 。
	A.流式細胞技術

 
B.免疫組化技術
 
C.原位雜交技術
 
D.PCR 技術